使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品，人蛋白ELISA檢測試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡5-30分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未用完，板條應裝入密封袋中保存。實驗中不用的板條應立即放回包裝袋中，密封保存，以免變質，不用的其它試劑應包裝好或蓋好，不同批號的試劑不要混用。使用一次性的吸頭以免交叉污染，吸取終止液和底物A、B液時，避免使用帶金屬部分的加樣器。使用干凈的塑料容器配置洗滌液。
　　稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結果，各步加樣均應使用加樣器，并經常校對其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在5分鐘內，如標本數量多，使用排槍加樣，封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染，嚴格按照說明書的操作進行，試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準。
　　吸取液體時，要用量程和需要量接近的槍去吸，減少誤差，將液體加到酶標孔中時，避免槍頭和孔內液體接觸，可使槍頭上的液滴和孔壁接觸，液滴會自然流下去，液體全部加完后，可將酶標板在桌子上平行輕輕晃動30秒，混勻液體。也可以用酶標儀的晃動功能。
　　人蛋白ELISA檢測試劑盒溫浴時，要用不干膠或膠帶紙封好酶標板，防止水分的蒸發，洗板時，每次洗液加入后，應靜置分鐘，使清洗更加*。沒有洗板機時，倒去液體后，要將酶標板在報紙或毛紙上用力拍干，待檢樣品要澄清，否則會影響結果，溫浴時間應遵守試劑盒規定，應盡量做雙孔實驗，這樣才能保證數據的準確性。