海魚分枝桿菌探針法熒光定量PCR檢測(cè)試劑盒RNA質(zhì)量檢測(cè):
)紫外吸收法測(cè)定
先用稀釋用的TE溶液將分光光度計(jì)調(diào)零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋(:00)后,讀取其在分光光度計(jì)260nm和280nm處的吸收值,測(cè)定RNA溶液 濃度和純度。
濃度測(cè)定
A260下讀值為表示40 g RNA/ml。樣品RNA濃度(g/ml)計(jì)算公式為:A260 ×稀釋倍數(shù)× 40 g/ml。具體計(jì)算如下:
RNA溶于40 l DEPC水中,取5ul,:00稀釋至495的TE中,測(cè)得A260 = 0.2
RNA 濃度= 0.2 ×00 ×40 g/ml = 840 g/ml 或 0.84 g
取5ul用來測(cè)量以后,剩余樣品RNA為35 l,剩余RNA總量為:
35 l × 0.84 gl = 29.4 g
②純度檢測(cè)
RNA溶液的A260/A280的比值即為RNA純度,比值范圍.8到2.。
2)變性瓊脂糖凝膠電泳測(cè)定
①制膠
g瓊脂糖溶于72ml水中,冷卻至60℃,0 ml的0× MOPS電泳緩沖液和8 ml的37% (2.3 M)。
0×MOPS電泳緩沖液
濃度 成分
0.4M MOPS,pH 7.0
0.M 乙酸鈉
0.0M EDTA
灌制凝膠板,預(yù)留加樣孔至少可以加入25 l溶液。膠凝后取下梳子,將凝膠板放入電泳槽內(nèi),加足量的×MOPS電泳緩沖液至覆蓋膠面幾個(gè)毫米。