腺伴隨病毒PCR試劑盒的PCR反應(yīng)條件設(shè)置：

a）預(yù)變性：95℃，5 min可以讓白細(xì)胞裂解，釋放可用于PCR擴(kuò)增的基因組DNA。請勿縮短時(shí)間或降低溫度。

b）退火溫度：退火溫度設(shè)置為引物Tm值即可。然而，使用高的退火溫度可以有效減少非特異性擴(kuò)增，并提高全血模板的擴(kuò)增效率。因此，如擴(kuò)增產(chǎn)物特異性較差，可以建立一個(gè)溫度梯度反應(yīng)去尋找引物模板zui適退火溫度。

c）延伸時(shí)間：按30 sec/kb設(shè)定，如不足30 sec，設(shè)置30 sec即可。

d）擴(kuò)增循環(huán)數(shù)：35個(gè)循環(huán)已可以擴(kuò)增足量產(chǎn)物。太多的循環(huán)將會(huì)導(dǎo)致非特異性擴(kuò)增增加。

PCR完成后，建議將反應(yīng)液于000× g (大約4000 rpm) 離心～3 min以沉淀血細(xì)胞碎片，之后取上清進(jìn)行下游分析。該步驟可有效去除多種血液組分。當(dāng)使用高濃度血液模板時(shí)此步尤為重要，因?yàn)榻?jīng)過PCR循環(huán)，反應(yīng)管中會(huì)存在大量的血細(xì)胞碎片。這些碎片會(huì)干擾下游的檢測，如瓊脂糖電泳檢測。注意：由于血液本身的原因，PCR 結(jié)束后在 PCR 管的底部會(huì)出現(xiàn)透明凝膠狀物質(zhì)，此為正常現(xiàn)象。