酵母雙雜交實驗常見問題分析及處理方法

在某些情況下，國產ELISA試劑盒在液體培養基中培養不好的菌珠可以在固體培養基上生長得很好。首先重懸克隆于ml的SD/–Trp，接著將重懸液平鋪于5 個00-mm的SD/–Trp平板，在30℃下溫浴，直至平板上的克隆相互粘在一起。用5ml 0.5X YPDA刮下每塊板上的克隆，并收集到一管中，這樣就可以使用這個細胞重懸液進行正常的雜交反應。

如果誘餌蛋白能直接激活報告基因的表達，該如何處理?

該蛋白很可能有轉錄激活域，是個轉錄因子。可以通過基因重組切掉轉錄激活域，然后重新檢測其是否自激活，但要注意重組也有可能破壞蛋白之間的互作。

轉化效率太低怎么辦?

可以采用以下方法解決：

)國產ELISA試劑盒檢測一下DNA的純度，如果可以的話，重新用乙醇純化。

2)DNA-BD/誘餌蛋白很可能是有毒的。

3)不適當的培養基，重新配制培養基，并做對照轉化。

4)檢測pGBT9對照載體的轉化效率，放置于SD/–Trp平板上，轉化效率應該在 x05 colonies/mg DNA以上。

雜交效率不高，該如何處理?

在雜交中，預轉化的誘餌細胞的數量可能不夠。當對誘餌菌株進行液體培養過夜時，應挑選大的、新鮮的克隆進行培養，經過離心和重懸后，再使用血球計對細胞進行計數。密度應該在 x09/ml。

一個甚至兩個融合蛋白對酵母細胞有毒。你可以通過重組方法來減輕毒性，同時又能保證蛋白的相互作用。或者使用表達水平較低的載體。國產ELISA試劑盒也可以在瓊脂平板或濾膜上進行雜交。但同時必須作雜交對照實驗。