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微生物菌種冷凍保存法

更新時間:2015-11-11 點擊量:802

    冷凍保存法:適用于抗凍力強的微生物。這些微生物可在其菌體細胞外遭受凍結的情況下而不受損傷,而對其它大多數微生物而言,無論在細胞外凍結還是在細胞內凍結,都會對菌體造成損傷,因此當采用這種保藏方法時,應注意以下幾點,

① 要選擇適于冷凍干燥的菌齡細胞;

② 要選擇適宜的培養基,因為某些微生物對冷凍的抵抗力,常隨培養基成分的變化而顯示出巨大差異;

③ 要選擇合適的菌液濃度,通常菌液濃度越高,生存率越高,保存期也越長;

④ 在菌液內不添加電解質(如食鹽等);

⑤ 可在菌液內添加甘油等保護劑,以防止在冷凍過程中出現菌體大量死亡的現象。同樣,也可添加各種糖類、去纖維血液和脫脂牛乳等具有良好保護效果的溶劑,但對有些微生物而言,不加保護劑時更有效。

⑥ 原則上應盡快進行冷凍處理,但當加入保護劑時,可靜置一段時間后再進行處理。

⑦ 就動物細胞而言,應在-20℃范圍內以℃/min左右的速度緩慢降溫,此后必須盡快降到貯藏溫度;而對絕大多數微生物而言,則不必如此,如結構較為復雜的原蟲則可在-35℃范圍內進行緩慢降溫,而噬菌體則必需采用上述的二階段法進行冷凍;

⑧ 若進行保存,則貯藏溫度越低越好;

⑨ 取用冷凍保存的菌種時,應采取速融措施,即在35~40℃溫水中輕輕振蕩使之迅速融解。而就厭氧菌來說,則應選擇靜置融化的措施。當冷凍菌融化后,應盡量避免再次冷凍,否則菌體的存活率將顯著下降。細胞

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