有兩種方法用來檢測(cè)抗原特異性IgE抗體：（）IgE抗體檢測(cè)，前面稱為放射免疫吸附試驗(yàn)（2）淋巴細(xì)胞組胺釋放試驗(yàn)。描述淋巴細(xì)胞組胺釋放試驗(yàn)是在50多年以前，隨后它被改進(jìn)和自動(dòng)化。22-25先用葡聚糖沉淀法分離外周血淋巴細(xì)胞，洗滌，用含鈣和鎂離子的緩沖液懸浮。往洗滌過的固定量的淋巴細(xì)胞中，加入不同濃度的變應(yīng)原提取物，混合物在37℃孵育一小時(shí)。4℃冷卻試管以終止反應(yīng)，通過離心分離細(xì)胞。變應(yīng)原與結(jié)合在細(xì)胞上的IgE抗體發(fā)生反應(yīng)后，嗜堿細(xì)胞釋放組胺至上清液，先用丁烷再用酸提取組胺?？捎脽晒夥止夤舛扔?jì)或RIA方法檢測(cè)提取物中的組胺濃度。26.27手工操作的熒光分光光度計(jì)法，可檢測(cè)大約ng的組胺。RIA法更敏感。用細(xì)胞釋放的組胺占組胺總濃度的百分比來表示結(jié)果，將未接觸過變應(yīng)原提取物的淋巴細(xì)胞溶于高氯酸，然后在該細(xì)胞溶解產(chǎn)物中檢測(cè)組胺的總濃度。

淋巴細(xì)胞組胺釋放試驗(yàn)詳細(xì)說明了結(jié)合在細(xì)胞上的IgE抗體的特異性，也表明了釋放介導(dǎo)因子的機(jī)制在功能上的完整。大約5%的個(gè)體，他們的淋巴細(xì)胞在體內(nèi)不釋放組胺。28盡管已發(fā)展了自動(dòng)化系統(tǒng)來檢測(cè)組胺，但組胺釋放試驗(yàn)的臨床應(yīng)用仍然有限，因?yàn)樗笫褂眯迈r血液，而且，僅單獨(dú)使用血液的一部份就能檢測(cè)出的變應(yīng)原也很有限。29還有，用這些方法測(cè)定組胺時(shí)，存在相當(dāng)大的室內(nèi)實(shí)驗(yàn)室差異。

IgE抗體檢測(cè)是一個(gè)雙位點(diǎn)IMA。3該方法的*階段：IgE抗體待測(cè)的血清標(biāo)本與固相結(jié)合的變應(yīng)原免疫吸附劑反應(yīng)。第二階段：2-4小時(shí)后，沖掉沒有抗體的血清部份，變應(yīng)原與放射性標(biāo)記或酶標(biāo)，及經(jīng)親和力層析法純化的抗體或單克隆抗-IgE抗體一起孵育。第二階段的抗-IgE抗體與變應(yīng)原免疫吸附劑的結(jié)合，可以檢測(cè)在*階段被結(jié)合的抗體。

IgE抗體檢測(cè)并沒有測(cè)出IgE抗體的實(shí)際濃度。許多過敏性個(gè)體的血清，含的抗體濃度都超過變應(yīng)原免疫吸附劑的結(jié)合能力，因而*階段孵育的上清液中，含有過剩的IgE抗體。32而且，由于大多數(shù)變應(yīng)原都是復(fù)雜的蛋白質(zhì)或糖化蛋白，所以，各血清包含的是能以不同的親和力與變應(yīng)原反應(yīng)的抗體混合物。而且，在一限定的范圍，第二階段抗體的結(jié)合與血清里的IgE抗體濃度成比例。這層關(guān)系已在用校正的標(biāo)準(zhǔn)曲線定量測(cè)定IgE抗體的研究應(yīng)用中被用到。33.34然而，由于常規(guī)的IgE抗體檢測(cè)，IgE抗體通常都過量，第二階段抗體的結(jié)合不僅反映了待測(cè)抗體的量，還反映了它的親和力，因此，結(jié)果是半定量的。

正如前面Wide等人3描述的那樣，IgE抗體檢測(cè)使用了與交聯(lián)匍聚糖珠粒共價(jià)結(jié)合的變應(yīng)原。隨后人們又使用了各種別的固相材料，34.35包括纖維素載體，微晶纖維素顆粒，瓊脂糖珠子，濾紙，多聚乙烯小杯或微量滴定孔。這些固相材料大多都是帶有游離氫氧根的多醣類，該氫氧根能與溴化氰反應(yīng)形成穩(wěn)定的咪多卡中間物。36后者與蛋白質(zhì)變應(yīng)原的氨基部份反應(yīng)形成共價(jià)鍵。與多聚乙烯孔或小杯的結(jié)合是非共價(jià)吸附。臨床實(shí)驗(yàn)用時(shí)，變應(yīng)原免疫吸附應(yīng)該含有原始變應(yīng)原提取物的所有免疫源性成份，并且與復(fù)雜的變應(yīng)原具相同比例。雖然監(jiān)測(cè)蛋白質(zhì)與固相發(fā)生化學(xué)結(jié)合，相對(duì)來說比較容易，但在不同的變應(yīng)原系統(tǒng)，很少有這樣一些數(shù)據(jù)提供，即能夠表明所有的相關(guān)變應(yīng)原都被結(jié)合上了。Alternaria變應(yīng)原已被具體地研究過，吸附研究表明，所有相關(guān)的免疫源性成份都被結(jié)合到了固相免疫吸附劑上。用固相免疫吸附劑吸附0個(gè)Alternaria過敏病人的血清，該血清池的皮膚致敏活性將喪失。37確保所有相關(guān)變應(yīng)原都與固相免疫吸附劑結(jié)合上的另一方法就是，用含變應(yīng)原的溶液與化學(xué)活化的微粒子免疫吸附劑結(jié)合。38沖洗，懸浮吸附試劑，從對(duì)還在疑問當(dāng)中的變應(yīng)原過敏的幾個(gè)個(gè)體中得到血清，然后用這些不同量的血清來檢測(cè)，從而得到一系列劑量反應(yīng)曲線。當(dāng)所有的變應(yīng)原都固相免疫吸附劑結(jié)合后，劑量反應(yīng)曲線變平。這點(diǎn)之前制備的各免疫吸附劑搭配后產(chǎn)生zui終的固相免疫吸附劑。

如前所述，商業(yè)上已提供了好幾種類型的變應(yīng)原免疫吸附劑。商業(yè)提供的zui普遍的是使用纖維載體或免疫吸附盤，但小杯型的免疫吸附劑如微量滴定孔，也有提供。無論使用哪一型試劑，在技術(shù)上都很方便。因?yàn)樵跍y(cè)定過程中，不需要離心。試劑一旦配置好，都很穩(wěn)定。

IgE抗體檢測(cè)的分析靈敏度部份是由第二階段使用的標(biāo)記的抗-IgE抗體決定。商業(yè)上放射性標(biāo)記、親和力層析純化的抗-IgE抗體作為蛋白質(zhì)的檢測(cè)，效果很好，可以定量檢測(cè)ng的IgE抗體。39為了循環(huán)使用放射性標(biāo)記的抗-IgE抗體，商業(yè)商已發(fā)展了使用酶連抗體的免疫方法。這些方法的分析特征跟舊的RIA方法相似。放射性標(biāo)記的單克隆抗體在商業(yè)上也有提供。

幾乎所有的常見變應(yīng)原（包括動(dòng)物上皮細(xì)胞，食物，霉菌，塵，昆蟲毒液，一些藥物，以及牧草、野草和樹木的花粉）都被提供用于IgE抗體的檢測(cè)。大多數(shù)藥物都低分子量的復(fù)合物，沒有游離的氨基部份，不會(huì)與溴化氰活化的固相起反應(yīng)。然而，有些低分子量的藥物，如胰島素，卻能與之結(jié)合并制成令人滿意的免疫吸附劑。至于，Penicilloyl可以與Polylysine或蛋白質(zhì)載體結(jié)合，后者又可與活化的固相結(jié)合，以用于IgE抗體的檢測(cè)。40還沒提供有類似的試劑，用于檢測(cè)這類IgE抗體的檢測(cè)，即抗所謂的微量抗原性決定物，該物質(zhì)可能與一些急性過敏反應(yīng)有關(guān)。

如更前面所談到的，IgE抗體檢測(cè)不是定量的免疫測(cè)定，結(jié)果的描述也很復(fù)雜，因?yàn)橛泻脦追N公式可以用來給結(jié)果記分和報(bào)告結(jié)果。大多數(shù)商業(yè)上提供的、以結(jié)果的得分情況為根據(jù)的方法，都是以與病人劑量反應(yīng)曲線數(shù)據(jù)做對(duì)比為根據(jù)。兩種方法zui常用：把一系列陽性質(zhì)控物的稀釋液與變應(yīng)原免疫吸附劑一起孵育，得到參考曲線；或用結(jié)合抗-IgE抗體的免疫吸附劑去捕獲標(biāo)準(zhǔn)液中的IgE，該標(biāo)準(zhǔn)液中一已知量的IgE蛋白質(zhì)。（如25U/ml）。無論哪一種情況，都要定義一個(gè)閾值，用來表示IgE與固相的非特異性結(jié)合（陰性）和gE與免疫吸附劑的變應(yīng)原特異性結(jié)合（陽性）之間的臨界值。定量表示結(jié)果可以用單位/毫升，半定量表示是從0級(jí)（陰性）- 6級(jí)（強(qiáng)陽性），或用比率來表示：待測(cè)血清的結(jié)合跟同一方法檢測(cè)到的非過敏個(gè)體血清池的結(jié)合相比。理論上，zui后這種方法比較合適，因?yàn)椴豢赡芗僭O(shè)每一個(gè)抗體-變應(yīng)原系統(tǒng)都產(chǎn)生相同的劑量反應(yīng)曲線。

除了隨機(jī)誤差，還有別的原因?qū)е翴gE抗體檢測(cè)的結(jié)果有誤。IgE蛋白質(zhì)水平增高的血清和許多變應(yīng)原免疫吸附劑一起檢測(cè)的時(shí)候，由于非特異性結(jié)合的增加，血清會(huì)產(chǎn)生臨界或弱陽性結(jié)果。IgE濃度低于000 U/ml時(shí)不會(huì)出現(xiàn)這種現(xiàn)象，除非把陰性和陽性的分界點(diǎn)設(shè)在很低的水平。42由于IgG抗體對(duì)IgE抗體結(jié)合的抑制，可能出現(xiàn)假陰性結(jié)果。43IgG抗體的親和力與IgE抗體相似，而且，在免疫治療中的病人身上，通常以ng/ml的濃度出現(xiàn)。44IgE抗體的檢測(cè)，對(duì)判定已接受治療的病人身上是否還有臨床過敏性存在作用不大，在未接受過治療的病人身上，很少發(fā)現(xiàn)有高水平的IgG抗體。

由于沒有*可靠的參考方法來定義一個(gè)變應(yīng)原的敏感性，所以很難定義IgE抗體的診斷靈敏度和特異性。但很多的臨床研究，都把IgG抗體檢測(cè)的結(jié)果與體內(nèi)診斷試驗(yàn)（皮膚測(cè)試，吸入抗原或兩者）和過敏性疾病家族史做對(duì)比。從這些研究中可以很清楚地看到：由于接觸抗原與檢測(cè)的間隔時(shí)間不同、變應(yīng)原種類不同、病人年齡以及受影響的靶器官不同，使得診斷靈敏度有相當(dāng)大的變化。更重要的是，IgG抗體檢測(cè)的敏感性與臨床敏感性成正比。不考慮變應(yīng)原或過敏性疾病，對(duì)變應(yīng)原顯著過敏的個(gè)體，IgG抗體檢測(cè)的結(jié)果可能為陽性，而在具輕微過敏性的個(gè)體中可能為陰性。

在不同的變應(yīng)原系統(tǒng)中，許多研究都支持這樣一個(gè)結(jié)論：對(duì)變應(yīng)原具有輕微過敏的個(gè)體，皮膚試驗(yàn)比IgE抗體檢測(cè)更敏感。然而，也有許多類似的研究表明，用陽性內(nèi)臟激發(fā)試驗(yàn)，皮膚測(cè)試?yán)锖艽笠徊糠莸娜蹶栃圆荒鼙淮_認(rèn)。這種討論有點(diǎn)不切實(shí)際：對(duì)變應(yīng)原顯著過敏的病人，無論皮試還是IgE抗體實(shí)驗(yàn)，都很可靠，而對(duì)輕微程度的臨床過敏，兩者都不是*可靠。

與皮試相比，檢測(cè)IgE抗體有一定的優(yōu)勢(shì)：它方便；對(duì)病人沒有危險(xiǎn)；結(jié)果不受藥物治療的影響。除此之外，對(duì)某些群體的病人，更應(yīng)使用IgE抗體檢測(cè)而不是皮試：如嬰幼兒、皮膚劃紋癥病人或全身性皮膚炎病人。IgE抗體檢測(cè)也有不足：血清學(xué)實(shí)驗(yàn)比皮試昂貴而敏感性卻不如它，且不能立即出結(jié)果。
皮試可用多種變應(yīng)原，與此相比，多種IgE抗體的檢測(cè),所需要的花費(fèi)卻限制了它作為過敏性疾病篩選的用途。近年，人們通過改進(jìn)IgE抗體的測(cè)定方法，發(fā)展了多變應(yīng)原IgE抗體檢測(cè)，它可能更有效。多變應(yīng)原IgE抗體檢測(cè)是在同一試管中，加入多種變應(yīng)原的免疫吸附劑，或使用已結(jié)合多種變應(yīng)原的吸附劑。多變應(yīng)原方法分析的敏感性可與單變應(yīng)原方法相比。對(duì)鑒別吸入性變應(yīng)原導(dǎo)致呼吸道變態(tài)反應(yīng)的孩子，多變應(yīng)原方法的診斷敏感性比IgE抗體檢測(cè)更高，46 當(dāng)然，要證明該實(shí)驗(yàn)篩選過敏性疾病的臨床用途，還需更多的研究。